微量分光光度計(jì)克隆測(cè)定奶山羊脂肪酸合酶基因啟動(dòng)子的全長(zhǎng)序列,進(jìn)行活性區(qū)域分析,為奶山羊FAS基因功能和表達(dá)調(diào)控機(jī)理研究提供依據(jù).根據(jù)牛和人脂肪酸合酶基因啟動(dòng)子的同源序列以及西農(nóng)薩能奶山羊脂肪酸合酶基因5UTR區(qū)域,分別設(shè)計(jì)上、下游引物,以西農(nóng)薩能奶山羊全血DNA為模板克隆啟動(dòng)子序列.依據(jù)生物信息學(xué)分析結(jié)果重設(shè)引物,將FAS啟動(dòng)子基因分段克隆并連接到熒光素酶表達(dá)載體PGL-3,與Psv-β-半乳糖苷酶對(duì)照載體共轉(zhuǎn)染293、MCF-7細(xì)胞,進(jìn)行熒光素酶活性檢測(cè)和β-半乳糖苷酶的活性檢測(cè).FAS基因啟動(dòng)子序列全長(zhǎng)2 640 bp,與牛、人FAS啟動(dòng)子序列同源性90%以上,包括數(shù)個(gè)潛在SP1、Ets、LSF等轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合位點(diǎn)和CCAAT框、GC框.-1 040-340 bp處可能包含啟動(dòng)子活性中心,通過啟動(dòng)子缺失片段試驗(yàn)將活性中心范圍縮小至-721-540 bp之間.通過克隆FAS基因啟動(dòng)子區(qū)域,分析表明啟動(dòng)子前端存在負(fù)調(diào)控元件,找出了啟動(dòng)子小活性中心。
基因克隆技術(shù)是生命科學(xué)技術(shù)領(lǐng)域里非常重要的部分，是分子生物學(xué)的核心技術(shù)，其目的是獲得某一基因或DNA片段的大量拷貝，用于深入分析基因的結(jié)構(gòu)與功能，并可達(dá)到人為改造細(xì)胞以及物種遺傳性狀的目的?；蚩寺⌒g(shù)中目的基因的獲得、目的基因和載體的連接、重組分子的擴(kuò)增和鑒定等關(guān)鍵步驟中基礎(chǔ)的是核酸濃度的測(cè)定，如果所用核酸濃度或者純度不夠，可能會(huì)造成實(shí)驗(yàn)的不理想或失敗，將會(huì)浪費(fèi)大量的人力物力，所以核酸濃度以及純度的檢測(cè)是*的。微量分光光度計(jì)正是測(cè)量核酸濃度以及純度的理想儀器，自帶觸摸屏、渦旋，直接顯示核酸濃度比值，同時(shí)有背景消除，顯示核酸的紫外吸收峰圖。
微量分光光度計(jì)是測(cè)量核酸和蛋白濃度理想的選擇。
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